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组织及血液碱性磷酸酶测试盒(AKP/ALP)

简要描述:SH676K-50 组织及血液碱性磷酸酶测试盒(AKP/ALP)
货号:SH676K-50
规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
储存条件:2-8℃

  • 产品型号:SH676K-50
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-10-09
  • 访  问  量:201
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SH676K-50 组织及血液碱性磷酸酶测试盒(AKP/ALP)

货号:SH676K-50
规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
储存条件:2-8℃

SH676K-50 组织及血液碱性磷酸酶测试盒(AKP/ALP)

组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书  

可见分光光度法

注意:正式测定前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号:SH676K

规格:50T/24S

产品内容:

提取液:液体30mL×1 瓶,4保存。

试剂一:液体10mL×1 瓶,4避光保存。

试剂二:液体10mL×1 瓶,4避光保存。

试剂三:液体30mL×1 瓶,4避光保存,变成蓝绿色不能使用。

标准品:液体0.5mL×1 支,2μmol/mL 酚标准液,4保存。

产品说明:

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁qing化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm 有特征光吸收;通过测定510nm 吸光度增加速率,来计算AKP 活性。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

称取约0.1g 组织,加提取液1mL 充分研磨,410000rpm 离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。

二、测定步骤:

1.可见分光光度计预热30 min 以上,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 操作表

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

蒸馏水

-

-

20

-

2μmol/mL标准

-

-

-

20

上清液

20

-

-

-

试剂一

200

200

200

200

试剂二

200

200

200

200

混匀后置于 37水浴中保温 15min

试剂三

600

600

600

600

上清液

-

20

-

-

混匀后于 510 nm测定吸光度,分别记为 A测定管、 A对照管、 A空白管、 A标准管。

 

三、AKP/ALP 活性计算:

1.按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V ]÷(Cpr×V )÷T

=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

2.按样本鲜重计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 活力(U/g 鲜重)= [C 标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V] ÷(W÷V提取×V)÷T

=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

3.血液中ACP 活性计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 活力(U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V ] ÷V ÷T =0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

标准品:2μmol/mL反总:反应体系总体积(mL),1020μL=1.02mL V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.02mLT:反应时间(min),15 min提取:加入提取液体积,1mLW:样本鲜重,gCpr:样本蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3、加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不wan全。

SH676K-50 组织及血液碱性磷酸酶测试盒(AKP/ALP)

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