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土壤中性磷酸酶试剂盒(NP)

简要描述:SH673W-100 土壤中性磷酸酶试剂盒(NP)
货号:SH673W-100
规格:100管/96样
检测方法:微量法
储存条件:2-8℃

  • 产品型号:SH673W-100
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-10-09
  • 访  问  量:134
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SH673W-100 土壤中性磷酸酶试剂盒(NP)

货号:SH673W-100
规格:100管/96样
检测方法:微量法
储存条件:2-8℃

SH673W-100 土壤中性磷酸酶试剂盒(NP)

土壤中性磷酸酶(soil neutral phosphatase,S-NP)活性测定试剂盒(微量法)说明书

货号SH673W

规格100T/96S

产品内容:

试剂一:液体×1瓶,4避光保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体×1瓶,4保存。

试剂四:粉剂×1支,4避光保存。临用前加576μL无水乙醇(自备),24 μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1支,0.5 μmol/mL苯酚标准液,4保存。

产品说明:

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

中性环境中,S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-NP活性。

试验中所需的仪器和试剂:

紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

操作步骤:    

一、粗酶液提取:  

称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4 mL试剂一并且摇匀后,置于37恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min,取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤:

1、  分光光度计预热30 min以上,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。

2、  空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10 μL蒸馏水,20 μL试剂三,4 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A空白管。

3、  标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10 μL标准液,20 μL试剂三,4 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A标准管。

4、  测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10 μL上清液,20 μL试剂三,4 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。

三、S-NP活性计算:

A.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

活性单位定义:37中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。

S-NPnmol/d/g=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V÷W÷T

=725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准液:0.5 μ mol/mL V总:催化体系总体积,1.45mLW:土壤样品质量,gT:催化反应时间,24 h=1 d

B.使用96孔板测定的计算公式如下:

活性单位定义:37中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。

S-NPnmol/d/g=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V÷W÷T

=725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准液:0.5 μ mol/mL V总:催化体系总体积,1.45mLW:土壤样品质量,gT:催化反应时间,24 h=1 d

SH673W-100 土壤中性磷酸酶试剂盒(NP)

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