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DNA病毒基因组提取试剂盒

简要描述:EX1754 DNA病毒基因组提取试剂盒
规格:50T/ 100T
保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。裂解液存放于-20℃

  • 产品型号:EX1754
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-10-09
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EX1754 DNA病毒基因组提取试剂盒

规格:50T/ 100T
保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。裂解液存放于-20℃

EX1754 DNA病毒基因组提取试剂盒

本试剂盒仅适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组,不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤(仅供参考):

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、 取病毒上清液0.5mL12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀。

2、 向病毒上清中加入20μL的裂解液(10mg/ml),充分混匀,65℃消化10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次。

3、 向管中加入500μL溶液V,充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750μL,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

4、 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

5、 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、 向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、 12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min12000rpm离心1min

9、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心2min,即可得到高质量的病毒基因组DNA

注意事项:

  1. 裂解液需放置-20℃保存。

  2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

  3. 若溶液V中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解再使用,不影响效果。

  4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)pH 值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

  5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50ug/ml双链DNA40ug/ml单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

  6. 如果病毒含量过低,最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到,但PCR等其他实验还会有结果

EX1754 DNA病毒基因组提取试剂盒


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