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明胶-琼脂糖凝胶4FF

简要描述:TL484F 明胶-琼脂糖凝胶4FF
英文名称: Gelatin Sepharose 4FF
储存条件: 4℃
外观(性状): 颗粒
单位: 瓶

  • 产品型号:TL484F
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-09-01
  • 访  问  量:174
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TL484F 明胶-琼脂糖凝胶4FF

英文名称: Gelatin Sepharose 4FF
储存条件: 4℃
外观(性状): 颗粒
单位: 瓶

TL484F 明胶-琼脂糖凝胶4FF

明胶-琼脂糖凝胶4FF:分离试剂,层析介质。

明胶-琼脂糖凝胶 4FF 是采用溴化氰法将明胶耦合到琼脂糖凝胶 4FF 基质上的一种亲和层析填 料。明胶是一种高分子糖蛋白,在多种细胞的表面和许多细胞外液(包括血浆)中都发现了明胶的 存在,它可以特异性的结合纤维连接蛋白。明胶琼脂糖凝胶 4FF 是专为纯化或除去纤维连接蛋白的 一种亲和层析填料。

1 技术指标

2 使用方法

2.1 准备凝胶

(1)让凝胶和所有的试剂达到工作时的温度。

(2)配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

(3)明胶琼脂糖凝胶 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中,取适量凝胶,清洗掉 20%的乙醇,抽 干。用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1 的比例)配成匀浆。

2.2 装柱

(1)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端 无气泡。

(2)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口, 使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。

(3)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定。用 2~3 倍柱体 积的缓冲液平衡柱子。

2.3 平衡 让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。

2.4 上样 (1)样品用平衡液配制,常用磷酸盐缓冲液或 Tris-HCl 缓冲液,浑浊的样品要离心和过滤后 上样。

(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标 产品。

2.4 洗脱 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 可以采用不同的方式洗脱纤维连接蛋白:

(1)使用含有溴盐的缓冲液,例如溴化钠或溴化钾,并在低于平衡缓冲液 pH 值的条件下洗脱。 一种推荐的洗脱缓冲液是:0.05 M 的醋酸钠,pH 值 5.0,含 1.0 M 的溴化钠或溴化钾。

(2)可以在平衡缓冲液中加入 8 M 的脲,来洗脱吸附在凝胶上的纤维连接蛋白。

(3)纤维连接蛋白还可以通过在平衡缓冲液中添加精氨酸来进行洗脱。

2.6 再生 根据样品的性质,明胶琼脂糖凝胶 4FF 可以再生,以达到重复使用的目的。可以采用 2-3 柱体 积的高 pH 值(0.1 M 的 Tris - HCl,0.5 M NaCl,pH 值 8.5)的缓冲液和低 pH 值(0.1 M NaAC,0.5 M NaCl,pH 值 4.5)的缓冲液交替清洗凝胶。一个周期重复 3 次,然后用 3-5 倍柱体积的平衡缓冲 液平衡,即可进行下次试验。如果在纯化过程中使用了洗涤剂或变性剂(如 8 M 尿素),那么这些 洗涤剂也可以用于洗脱缓冲液中。 2.7 清洗 在一些应用中,像变性的蛋白质或脂类这样的样品,在再生过程没有被洗脱下来,可以通过加 入一些洗涤剂,例如:0.1%的 Triton X-100 ,在 37°C 的条件下洗一会。立即用至少 5 倍柱体积的 结合缓冲重新平衡。 2.8 储存 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 应储存在 4-8℃,20%的乙醇溶液中。 特别注意: 上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。

TL484F 明胶-琼脂糖凝胶4FF

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