您现在的位置:首页 > 产品展示 > 蛋白与免疫 > 层析填料树脂 > TL7000巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

简要描述:TL7000 SulfoLink Coupling Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

  • 产品型号:TL7000
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-08-30
  • 访  问  量:264
品牌其他品牌供货周期现货

TL7000 SulfoLink Coupling Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

规格:5mL/25mL
别名: 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂 PabPur SulfoLink Beads
英文名称: SulfoLink Coupling Resin

TL7000 SulfoLink Coupling Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

ulfoLink Coupling Resin 是一类预活化树脂,可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原的固定化,进而对免疫血清中的抗体进行纯化

纯化流程

    SulfoLink Coupling Resin 针对巯基和氨基的偶联条件有所差异,对于含有巯基抗原偶联请参考1.1 流程,对于含有氨基抗原偶联请参考1.2 流程。

1.1 含巯基抗原的偶联流程

1.1.1 缓冲液准备

所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。

偶联液:50 mMTris,5 mMEDTA-Na,pH 8.5

封闭液:50 mMTris,5 mMEDTA-Na,50 mML-半胱氨酸,pH 8.5

保护液:20 mM 磷酸盐缓冲液,20% 乙醇,pH 8.0

结合/洗杂液: 20 mM 磷酸盐缓冲液,pH 8.0

洗脱液:100 mM 甘氨酸,pH 2.5-3.0

中和液:1 M Tris-HCl, pH 8.5

1.1.2 抗原准备

抗原样品使用前务必确保其巯基处于还原状态(可以使用Ellman’s Reagent 检测自由巯基的含量)。如果巯基已经氧化,必须对抗原进行还原,一般推荐使用还原剂TCEP(Tris(2-carboxyethyl) phosphine),TCEP 溶液很稳定,可以选择性的、高效的打开抗原中的二硫键,并且不影响抗原与树脂的偶联反应,每毫克抗原中TCEP 的添加量不超过12mg,需要自己进行优化。如果使用DTT 等含有巯基的还原剂,处理完样品必须要将还原剂去除,否则会影响抗原与树脂的偶联效率。使用偶联液溶解抗原,制备成终浓度为1-3 mg/ml 的抗原溶液。建议该溶液现用现配,储存时间过长会影响偶联效果。

1.1.3 抗原偶联

1)      取适量的SulfoLink Coupling Resin,加入合适的重力柱中,靠重力流干保护液,用3倍柱体积的偶联液平衡树脂,待偶联液流干,再加入3 倍柱体积的偶联液,重复操作2遍。共使用9 倍柱体积的偶联液。

2)      关闭柱子的下端出口,加入等体积的含巯基的抗原,混匀,取出至于合适的离心管中,置于28℃震荡孵育30min。

注:确保树脂充分悬浮起来,否则将大大影响偶联效率。

3)      将上述反应体系取出,转移至重力柱中,流干其中溶液,并收集流出,再用3 倍柱体积的偶联液清洗树脂,合并两次流出。

注:如有需要,可以使用Ellman’s Reagent 检测其中巯基含量,得出抗原残留量,从而计算偶联效率。

4)      关闭柱子的下端出口,加入等体积的封闭液,混匀,转移至合适的离心管中,置于28℃震荡孵育30min。

5)      将上述反应体系取出,转移至重力柱中,流干其中的封闭液。

注:如果立即使用,可以参考1.1.4 操作。如果以后使用,可以用3 倍柱体积的结合液清洗树脂,然后保存在等体积的保护液中,于2℃-8℃保存。

1.1.4 抗体纯化

1)      将偶联了抗原的树脂装入合适的层析柱,用5 倍柱体积的结合液进行平衡,使填料处于与抗体更易结合环境中,一方面保护目标抗体,另一方面提高抗体结合效率。

2)      将含有抗体的样品加到平衡好树脂中,为了保证抗体与树脂充分接触,提高目标抗体的回收率,可以控制上样流速在0.5-1 ml/min,并收集流出液。

3)      用10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,提高目的抗体的纯度,收集洗杂液。

4)      使用5-10 倍柱体积的洗脱液,收集洗脱组分,即目的抗体。

注:为了保持抗体活性,需要立即将洗脱组分透析至pH 7.0-8.0 的缓冲液中,或者先加入1/10倍洗脱组分体积的中和液,将洗脱组分进行中和,再透析。

5)      依次使用3 倍柱体积的结合液和5 倍柱体积的去离子水平衡树脂,最后再用5 倍柱体积的保护液平衡,然后保存在等体积的保护液中,置于2℃-8℃保存,防止填料被细菌污染。

1.2 含氨基抗原偶联流程

1.2.1 缓冲液准备

所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。

偶联液:0.1MNaHCO3,0.5MNaCl,pH 8.5

封闭液:50 mMTris, 5 mMEDTA-Na, 50 mML-半胱氨酸,pH 8.5

保护液:20 mM 磷酸盐缓冲液,20% 乙醇,pH 8.0

结合/洗杂液: 20 mM 磷酸盐缓冲液,pH 8.0

洗脱液: 100 mM 甘氨酸,pH 2.5-3.0

中和液:1 M Tris-HCl, pH 8.5

1.2.2 抗原准备

氨基是一种比较稳定的基团,所以,对于含有氨基的抗原没有太特殊的要求。使用偶联液溶解抗原,制备成终浓度为5-10 mg/ml的抗原溶液。

1.2.3 抗原偶联

1)      取适量的SulfoLink Coupling Resin,加入合适的重力柱中,靠重力流干保护液,用3倍柱体积的偶联液平衡树脂,待偶联液流干,再加入3 倍柱体积的偶联液,重复操作2遍。共使用9 倍柱体积的偶联液。

2)      关闭柱子的下端出口,加入等体积的含氨基的抗原,混匀,取出转移至合适的离心管中,置于28℃震荡孵育3-5 小时,或者2-8℃震荡孵育过夜(12-15 小时)。

注:确保树脂充分悬浮起来,否则将大大影响偶联效率。

3)      将上述反应体系取出,转移至重力柱中,其中的抗原溶液,并收集流出,再用3 倍柱体积的偶联液清洗树脂,合并两次流出,留待测试。

4)      关闭柱子的下端出口,加入等体积的封闭液,混匀,取出转移至合适的离心管中,置于28℃震荡孵育30min。

5)      将上述反应体系取出,转移至重力柱中,流干其中的封闭液。

注:如果立即使用,可以参考1.2.4 操作。如果以后使用,可以用3 倍柱体积的结合液清洗树脂,然后保存在等体积的保护液中,于2℃-8℃保存。

1.2.4 抗体纯化

1)      将偶联了抗原的树脂装入合适的层析柱,用5 倍柱体积的结合液进行平衡,使填料处于与抗体更易结合环境中,一方面保护目标抗体,另一方面提高抗体结合效率。

2)      将含有抗体的样品加到平衡好树脂中,为了保证抗体与树脂充分接触,提高目标抗体的回收率,可以控制上样流速在0.5-1 ml/min,并收集流出液。

3)      用10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,提高目的抗体的纯度,收集洗杂液。

4)      使用5-10 倍柱体积的洗脱液,收集洗脱组分,即目的抗体。

注:为了保持抗体活性,需要立即将洗脱组分透析至pH 7.0-8.0 的缓冲液中,或者先加入1/10倍洗脱组分体积的中和液,将洗脱组分进行中和,再透析。

5)      依次使用3 倍柱体积的结合液和5 倍柱体积的去离子水平衡树脂,最后再用5 倍柱体积的保护液平衡,然后保存在等体积的保护液中,置于2℃-8℃保存,防止填料被细菌污染。

1.3 SDS-PAGE 检测

将纯化抗体样品得到的流出组分、洗杂组分和洗脱组分以及原始含抗体样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。



TL7000 SulfoLink Coupling Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
相关文章