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鼠尾胶原蛋白Ⅰ型

简要描述:EZ0321 鼠尾胶原蛋白Ⅰ型
英文名称 : Rat tail tendon collagen type
储存条件 : 4℃保存,切勿冻存,效期一年。
单位 : 支

  • 产品型号:EZ0321
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-08-20
  • 访  问  量:233
品牌其他品牌货号EZ0321
供货周期现货主要用途生化研究
应用领域生物产业

EZ0321 鼠尾胶原蛋白Ⅰ型

英文名称 : Rat tail tendon collagen type

储存条件 : 4℃保存,切勿冻存,效期一年。

单位 : 支

鼠尾胶原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen 的方法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿,培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三维环境中生长。

1,在使用鼠胶原蛋白 I 型包被的细胞培养皿中检查到 PC-12 细胞的贴壁和生长。2,在 1mg/ml 浓度以上,pH 为 7 左右时可形成具有一定强度的三维胶,检查到 NIH-3T3 细胞在三维胶内正常生长、PC-12 细胞在三维胶表面正常生长。使用方法:1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度: 1-5ug/cm2以包被浓度为 2 ug/cm2为例:用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到 0.012mg/ml。

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后,用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

2、三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上,pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液(均需要无菌、预冷):10×PBS(可含10 mg/L的酚红用于pH指示)或10×培养液,0.1mol/L NaOH,0.1mol/L 乙酸(一般不用),双蒸水

A. 不含细胞的三维胶原的制备(以配制1mL,1mg/mL三维胶为例):将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中,加入 690μL H2O。然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100μL 10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B.含细胞的三维胶原的制备(以配制1 mL,1mg/mL三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200μL鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23μL 10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

注意事项:

鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。

EZ0321 鼠尾胶原蛋白Ⅰ型

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