您现在的位置:首页 > 技术文章 > 丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书

丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书

  • 发布日期:2023-11-02      浏览次数:415
    • 注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

      货号:SH114W

      规格:100T/96S

      产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系作人员。

      提取液:液体100 mL×1瓶,4℃保存;

      试剂一:液体5 mL×1       4℃保存;

      试剂二:液体25 mL×1瓶,4℃保存;

      标准液:液体1 mL×1支,   4℃保存。标准液:丙酮酸钠,1 mg/mL

       产品说明:

      丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。

      丙酮酸与2,4-二xiao基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二xiao基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。

      自备仪器和用品:

      可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

      操作步骤:

      一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

      1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%200W,超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min8000g,常温离心10min,取上清待测。

      2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min8000g,常温离心10min,取上清待测。

      3、血清(浆)样本:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为15~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置30min8000g,常温离心10min,取上清待测。

      二、操作步骤:

      1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

      2、标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至2512.56.253.1251.56250.781250μg/mL

      3、在微量玻璃比色皿或96孔板中加入75μL标准液或样本和25μL试剂一,混匀,静置2min,加入125μL试剂二,混匀,于520nm波长处测定吸光值A

      三、丙酮酸含量计算:

      1、根据标准品浓度和测定值建立标准曲线;x为丙酮酸钠含量(μg/mL),y为吸光值。

      2、按照血清(浆)体积计算

      丙酮酸含量(μg/mL= (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x

      3、按照样本蛋白浓度计算

      丙酮酸含量(μg/mg prot=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr

      4、按照样本质量计算

      丙酮酸含量(μg/g 质量)= (x×V1)÷(W×V1÷V2)=x÷W

      5、按照细菌或细胞数量计算

      丙酮酸含量(μg/104 cell=(x×V1)÷(500×V1÷V2)= x÷500

      V1:加入反应体系中样本体积,0.075mLV2:加入提取液体积,1mLV3:加入血清(浆)体积,0.1mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

      注意事项:

      如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

      技术指标:

      zui低检出限:0.1510 μg/mL

      线性范围:0.78125-50 μg/mL

      参考文献:

      [1] Venkatesh C, Ramalingam K. Lactic acid, pyruvic acid and lactate/pyruvate ratio in the Anoplocephalid tapeworm Stilesia globipunctata infecting sheep (Ovis aries)[J]. Veterinary parasitology, 2007, 144(1-2): 176-179.

      相关系列产品:

      SH132K/SH132W  己糖激酶(HK)活性检测试剂盒

      SH116K/SH116W  丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒

      SH137K/SH137W  磷酸果糖激酶(PFK)活性检测试剂盒

      SH243K/SH243W  3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活性检测试剂盒